少年時代から映画が大好きな幼馴染のダグ（ジャック・ブラック）とグリフ（ポール・ラッド）。
なかでも一番のお気に入りは『アナコンダ』であり、唯一無二のバイブルとして崇めていた。
彼らも40代を迎え、ダグは映画監督の夢を諦め、今や結婚式のカメラマンとして生計を立てている。
一方のグリフも俳優として成功することを夢見ているが、売れない日々を過ごしていた。
そんなある日、地元のパーティで再会した2人は、この“中年の危機”を乗り越えるべく、一念発起して長年の夢を実現させようと動き出す。

2人は友人らを引き連れ、意気揚々と物語の舞台・南米アマゾンへと向かう。
低予算ながら順調に撮影を進めていたのも束の間、グリフが誤って主役のヘビを殺してしまう大珍事が発生！
焦った一行は代役のヘビを探すべくジャングルの奥地へと繰り出すが…